マルチウェル細胞培養プレートのシーリングと汚染の問題

マルチウェル細胞培養プレートの読み込みと取り扱い：

細胞培養プレートは、細胞操作を実行する際の厳格な無被節の原理にも従います。すべての操作は標準化された科学的でなければならず、細胞の成長に追加の影響を与えません。最も一般的な問題は、サンプルを追加した後に細胞の均一性を確保し、細胞の成長状態に対する培地を変更する影響を最小限に抑える方法です。

聞く：
96および24ウェルの培養プレートまたはペトリ皿のふたは非常にゆるいもので、換気に便利ですが、細菌、カビ、その他の汚染物質も滑り込みますか？

答え：
蓋は非常にゆるく、セミオープン培養に属し、この目的は換気することです（実際、培養皿の外のCO2を培養皿と完全に交換し、培養のpH値を維持することです中くらい）。
すべてには利点と欠点があり、もちろん汚染の可能性が高まります。さらに、これにより、皿内の液体が蒸発します。これは、薬物の正確な投与に顕著です。したがって、次の2つの測定が必要です。インキュベーターの空気はきれいでなければなりません（通常の紫外線、アルコールスクラビング、およびインキュベーターをできるだけ開いて閉じている必要があります）b。インキュベーターの湿度は、常に100％（インキュベーターに滅菌蒸留水が配置された流し台）に保持する必要があります。
ペトリ皿のように、それはまた、逆さまの蓋をした容器であり、汚染されません。主に、カバーの「L」エッジによって生成される気流の負圧のために、ほこりに付着した微生物があり、気流を発生させるカバーの端を通過することはできません。換気効果は、空気の拡散によるものであり、気流は生成されないため、呼吸するだけで、細菌が浸透しません。

聞く：
24ウェルプレートを使用して、いくつかの井戸（超クリーンベンチ）に操作があり、他の井戸で培養される細胞があります。これが汚染を引き起こすのではないかと心配しています。何に注意を払うべきかわからない？

答え：
操作がウルトラクリーンベンチに標準化されている場合、問題はありません。培養プレートのカバーを最大限に活用し、操作する穴だけを露出し、他の穴をカバーで覆うことができると思います。
使用する前に包括的に検討し、すべての穴を最大限に活用してください。いくつかの穴だけを使用する必要がある場合は、片側のみを使用して、残りをカバーで覆うことができます。私は最初に右の穴を使用することに慣れています（右手にサンプルを追加するのが便利です）。

操作するときは、いくつかのガラススライドを使用してボードの片側を上げます。カバーを完全に開けないでください。一般的に問題ありません。
不均一な細胞分布とソリューション

聞く：
細胞は培養板に接種されており、細胞は常に末梢部分に集まっていますが、それに対処する方法は？

答え：
あなたの細胞がどのように混合されているのか聞いてもいいですか？それは文化プレートをピペットしたり振ったりしていますか？それが後者であり、それが円で揺れている場合、細胞が中心的な力のために末梢部分に投げられる可能性が非常に高いため、中央の細胞が少なくなります。 4週間以上！
ここに良い方法があります。シードプレートを栽培する前に、培養プレートをインキュベーターに数時間飽和させてから取り出します。細胞を植えるときは、力は軽い必要があります。ゆっくりと追加すると、細胞懸濁液がプレートの井戸に流れることができ、培養細胞は基本的に均等に成長します。シェーカーと一緒に振ることを忘れないでください。そうしないと、あなたの細胞はあなたが言ったように一緒に塊になります。
培養プレートの穴の直径が小さいほど、この現象はより明白です。この現象は、液体が壁に付着して井戸の培養溶液が液体レベルを形成しないようにするため、24枚と96ウェルプレートでは避けられませんが、凹型の鏡のように周辺は高くなっています。ただし、これら2種類のオリフィスプレートを使用する場合、追加の介入が必要なため、十分な量の培養ソリューションを追加することはできません。そのため、細胞は培養ソリューションとともに「エッジコレクション」になります。それはあなたが観察する必要がある指標に依存します。 MTTの場合、免疫組織化学は細胞層のために結果に影響します。
細胞を消化するときは、細胞の凝集を避けるためにピペッティングに均等に注意してください。井戸の培養溶液の量で十分です。一般に、接種するときは十分な培養ソリューションを追加し、介入を追加するときに一度ソリューションを変更します。介入ソリューションに追加された培養溶液の量は、接種時の培養溶液の量に等しくなります。この場合、「エッジセット」の現象が改善されるため、試してみることもできます。

聞く：
私がしたのは、プラーク層実験でした。セルを均一な層に広げるのが最善です。ウイルスが接種されている場合、ほとんどの穴は問題あり、それらのいくつかは均一ではありません。細胞群には大きな違いがあります。セルを追加する際にどのような方法を使用するかをお聞きしたいと思いますか？

答え：
消化後にセルを単一細胞懸濁液にピペットすることが重要です！プレートを分割するとき、各ウェルのセルの数が一貫していることを確認してください！
もちろん、処理要因もあります。井戸間の並列性も非常に重要です。たとえば、薬を追加するときは、希釈後に薬を混ぜて、各井戸の濃度が一貫していることを確認してください！
さらに、細胞と薬物を添加する場合、サンプルの追加のシーケンスによって引き起こされる細胞密度と薬物濃度の違いを避けるために、テストグループと対照群を順番に追加する必要があります！

聞く：
吹くのはすでに均一ですが、板張り、6つの穴、24ホールは常にやや不均一であり、中央に少し集中しています。さらに、カウントが行われることは明らかであり、1日か2日後には、各穴の密度が異なるため、検出に影響します。良い方法はありますか？

答え：
パスツールのピペットを使用する場合、ピペット内の細胞が自動的に沈むため、最初の数穴の細胞の数が大きく、細胞懸濁液が均一であり、液体は液体はしばしば大きく、液体はしばしば大きいため、毎回吸い込まないでください。 S-shapeルートに従ってください。
ピペットを使用する場合、液体が採取されるたびに井戸に対応するたびに、細胞が損傷するのを避けるために、ヒントを処理および除去する必要があります。先端で1対1の穴を追加する方が正確です。また、サスペンションの混合にも注意してください。

並列グループを設定するには、nで十分に大きくする必要があります（計算できます）。

めっき後に揺れないでください。揺れがセルが中心に向かって凝集するからです。一度板張るのが最善です。

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