PCR実験における試薬揮発の詳細な説明

PCR実験における試薬揮発の詳細な説明。

PCR実験では、反応システムを追加した後、蓋を慎重に覆い、試薬の揮発を避けるために蓋が閉じられていることを繰り返し確認します。しかし、時には疑問もあります。ふたがしっかりと閉じられていることを確認しましたが、実験が完了した後、試薬はまだ蒸発します。理由は何ですか？

実際、試薬揮発はPCR実験で最も一般的な問題の1つであり、試薬揮発に影響を与える多くの要因があります。

蒸発とは、PCR実験中にそれを指し、反応溶液は高温で蒸発し、ボトルの壁または上部カバーで凝縮して水霧または水滴を形成するか、ボトルキャップまたはフィルムのエアギャップから直接溢れ、結果として生じます。反応溶液の濃度の変化において。変化、反応溶液の量が減少し、一部は乾燥まで蒸発し、無効な実験をもたらしました。

1.熱い蓋圧、温度

PCR実験では、通常、蓋を加熱して、試薬蒸気の凝縮を防ぎます。加熱された蓋の温度は、通常、蒸気の凝縮を防ぐために反応溶液の温度よりも高くなります。

サーマルサイクラー加熱蓋は、調整不可能な加熱蓋、調整可能な加熱蓋、適応加熱蓋、自動加熱蓋の4つのタイプにほぼ分割できます。調整可能な加熱蓋は、指の密着圧縮を備えています。しっかりと締められないと、試薬は蒸発します。加熱された蓋の圧力を上げることにより、エッジの蒸発を最小限に抑えることができます。時には、密集がチューブをつまんでノブをひねることができます。通常の状況では、電気スマートヒーティングカバーは、さまざまな高さの消耗品を自動的に検出し、消耗品を自動的に圧縮し、圧力が均一で一定であるため、試薬の蒸発と手動誤差を減らし、実験的精度と再現性を向上させます。

2.消耗品の変形

蒸気漏れの場合、ほとんどの人は熱い蓋の圧力では十分ではないと考えています。熱い蓋の圧力は非常に重要ですが、それは1つの側面にすぎません。実際、消耗品も非常に重要です。

PCRオリフィスプレートは通常、プラスチック材料で作られており、加熱後に大きく膨張および変形します。 PCRオリフィスプレートの配置に使用されるPCR金属ベースの熱膨張速度は非常に低く、PCRオリフィスプレートは熱膨張後に平面に沿って正常に拡張できません。膨らんだ状態により、上部熱カバーがPCRオリフィスプレートの表面に完全に接触できなくなり、不均一な温度と圧力が発生し、PCRオリフィスプレートの端で試薬蒸発を引き起こし、PCR検出効果に影響を与えます。

3.消耗品はしっかりと密閉されていません

熱蓋と消耗品の緊密さは、PCRチューブキャップがしっかりと閉じられており、PCRウェルプレートの品質が不均一であることを意味するものではありません。高品質の消耗品、ノズルの表面とカバーは滑らかで、ボックスカバーの後ろのシールは良好であり、漏れるのは簡単ではありません。劣った消耗品には不均一な噴出物や放射状のラインがあり、漏れを簡単に引き起こしたり、乾燥させたりすることさえあります。

したがって、PCR実験では、高品質で適切な消耗品を選択してみてください。同時に、反応系を拡張して、反応に対するシステム蒸発の影響を最小限に抑えることができます。